河北來復(fù)醫(yī)藥科技有限公司
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前言
維生素B2又叫核黃素，為體內(nèi)黃酶類輔基的組成部分（黃酶在生物氧化還原中發(fā)揮遞氫作用），當(dāng)缺乏時，就影響機(jī)體的生物氧化，使代謝發(fā)生障礙。其病變多表現(xiàn)為口、眼和外生殖器部位的炎癥，如口角炎、唇炎、舌炎、眼結(jié)膜炎和陰囊炎等，故本品可用于上述疾病的防治。體內(nèi)維生素B2的儲存是很有限的，因此每天都要由飲食提供。維生素B2是水溶性維生素，容易消化和吸收，被排出的量隨體內(nèi)的需要以及可能隨蛋白質(zhì)的流失程度而有所增減；它不會蓄積在體內(nèi)，所以時常要以食物或營養(yǎng)補(bǔ)品來補(bǔ)充。廣泛存在于酵母、肝、腎、蛋、奶、大豆等中。
實驗部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設(shè)備
高效液相色譜儀-熒光檢測器
試劑材料
冰乙酸、甲醇、鹽酸均為色譜純；
氫氧化鈉、三水合乙酸鈉為分析純；
維生素B2標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%）；
木瓜蛋白酶：酶活力≥10 U/mg；
高峰淀粉酶：酶活力≥100 U/mg；
1 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4 g氫氧化鈉，加90 mL水溶解，冷卻后定容至100 mL；
0.1 mol/L鹽酸溶液：移取8.5 mL鹽酸，加水稀釋至1000 mL，搖勻；
0.05 mol/L乙酸鈉溶液：稱取6.08 g乙酸鈉，加900 mL水溶解，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH為4.0 ~ 5.0之間，加水定容至1000 mL；
0.1 mol/L乙酸鈉溶液：稱取13.60 g乙酸鈉，用水溶解并定容至1000 mL；
混合酶溶液：稱取2.345 g木瓜蛋白酶、1.175 g高峰淀粉酶，加水溶解后定容至50 mL。
樣品制備
稱取2 ~ 10 g混勻后的試樣（試樣中的維生素B2的含量大于5 μg）于100 mL具塞錐形瓶中，加入60 mL的0.1 mol/L鹽酸溶液，充分搖勻，塞好瓶塞。將錐形瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121℃下保持30 min，冷卻至室溫后取出。用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0 ~ 6.5，加入2 mL混合酶溶液，搖勻后置于37℃培養(yǎng)箱或者恒溫水浴鍋中過夜酶解。將酶解液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，用濾紙過濾或離心，取濾液或上清液，過0.45 μm水相濾膜作為待測液。
實驗條件
液相條件
色譜柱：Venusil®XBP C18(2) 5 μm，4.6 × 150mm，100 ?
流動相：0.05 mol/L乙酸鈉溶液︰甲醇 = 65︰35
熒光檢測器檢測波長：激發(fā)波長462 nm，發(fā)射波長522 nm
流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。
結(jié)果與討論
實驗結(jié)果
經(jīng)圖1、圖2可知，采用Venusil XBP C18(2)色譜柱檢測嬰幼兒配方奶粉中的維生素B2，峰形良好，保留時間穩(wěn)定，能夠滿足實驗要求。
圖1 維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液
圖2 嬰幼兒配方奶粉中的維生素B2
結(jié)論
本實驗依據(jù)GB 5009.85-2016第一法，用Venusil XBP C18(2)（5 μm，100 ?，4.6 × 150 mm）檢測嬰幼兒配方奶粉中的維生素B2，并結(jié)合液相色譜-熒光檢測器對樣品進(jìn)行了檢測，結(jié)果維生素B2保留時間穩(wěn)定，峰形良好，而且試樣中雜質(zhì)與維生素B2分離度良好，說明Venusil XBP C18(2)（5 μm，100 ?，4.6 × 150 mm）色譜柱能夠用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B2的檢測。
注意事項
可以在避光的條件下，用直接酸解法除去樣品中的蛋白質(zhì)。這種方法操作比較簡單，耗時短，成本也比較低。
附：相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格描述 |
包裝數(shù)量 |
訂貨號 |
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Venusil XBP C18（2） |
4.6 × 150 mm, 5 μm, 100 ? |
1支 |
VX951505-2 |
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1.5 mL樣品瓶 |
短螺紋透明帶書寫處 32 × 11.6 mm |
100/pk |
1109-0519 |
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1.5mL樣品瓶蓋 |
9 mm中心孔藍(lán)蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊 45°Shore A; 1.0 mm |
100/pk |
0915-1819 |
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微孔濾膜 |
水系，50 mm，0.45 μm |
100片 |
AM015045 |
應(yīng)用編號：AF10011
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